Noirot Spot E-3 PLUS 750 Вт

• Площадь обогрева: 6-9 м2
• Мощность (Вт): 750
• Степень защиты: IP24
• Рабочее напряжение (Гц): 150-242В/50 Гц
• Размеры (шир. х выс. х глуб.): 340x 440 x 80 мм
• Вес (кг): 4.0 кг
• Гарантия: пожизненная
• Производство: Франция

Инструкция по эксплуатации конвектора Noirot Spot E-3 PLUS в формате pdf

Noirot Spot E-3 PLUS 750 Вт (пр-во Франция) — это электрический конвектор с электронным термостатом с механическим управлением, штепсельной вилкой и ножками-роликами для мобильной установки в комплекте, мощностью 750 Вт. Конвектор Noirot Spot E-3 PLUS 750 подходит для основного обогрева площади 6-9 м2 (в зимний период при хорошей теплоизоляции помещения), либо для комфортного подогрева помещения площадью 9-13 м2 в период межсезонья. Применение современного монолитного нагревательного элемента позволяет избежать выгорания кислорода в помещении.

Особенности конвектора NOIROT серии Spot E-3 PLUS

• Абсолютно бесшумная работа
• Точный термостат (точность измерения температуры 0,1С) — экономия электроэнергии!
• Функция «авторестарта» — при пропадании электричества, после его включения, обогреватель продолжит поддерживать установленную температуру.
• Брызгозащитное исполнение IP24.
• II класс электрозащиты — приборы не требуют заземления.
• Конвекторы серии CNX-4 предназначены для долговременной автономной работы. При точном соблюдении правил эксплуатации исключена любая возможность воспламенения.
• Для подключения к электросети приборы оснащены стандартной вилкой без заземления.
• Безопасность: нагрев поверхности обогревателя не выше 60°С, отсутствие «острых» углов.
• Установка стационарная (кронштейн для крепления на стену) / мобильная (ролики-ножки в комплекте поставки).

Конвекторы
Мощность	750 Вт
Площадь обогрева	6-9 м2
Тип термостата	электронный
Габариты (ШхВхГ)	340x440x80 мм
Вес, кг	4,0
Гарантийный срок	пожизненная гарантия
Страна происхождения	Франция
Инструкция

Noirot Spot E-3 Plus 1000

Описание

Конвектор Noirot Spot E-3 Plus 1000 — отлично зарекомендовавший себя электрообогреватель на Российском рынке не первый год, как изделие определяющее критерии качества и надежности в области развития индивидуальных и комплексных систем электрического отопления в любых помещениях, даже с высокой влажностью. Электрический конвектор отопления Noirot Spot E-3 Plus отличает компактный, современный корпус, окрашенный в матово белый цвет, внешний вид которого способен отлично сочетаться с интерьером любого современного помещения. Конструкция обогревателя продумана таким образом, что подача нагреваемого воздуха, (согласно мощности прибора и площади, на которой он установлен), подразумевает его равномерное распространение с временным промежутком выхода на рабочую температуру всего за 1 — 1,5 минуты при минимальном энергопотреблении.

Конвекторы электрические Noirot серии Spot E-3 Plus применяются в качестве основного или дополнительного источника обогрева воздуха.  Принцип работы обогревателя, заключается в преобразовании электоэнергии в тепло без промежуточного теплоносителя (масла, воды, тосола и т.д.), путем естественной конвекции. Охлажденный воздух, проходит через нижнюю часть прибора и попадает на монолитный нагревательный элемент RX-Silence Plus, разогревается до нужной температуры и после чего, быстро поступает в отапливаемое помещение. Благодаря своей жесткой конструкции и специальному сплаву, конвектор не издает при тепловом расширении ни каких посторонних звуков, не сжигает кислород и обладает повышенной теплоотдачей, КПД которого можно определить как 100%.

Конвектор Noirot Spot E-3 Plus комплектуется высоконадежным электронным термостатом, способным с высокой точностью удерживать предустановленную температуру пользователем, с точностью >1ºС. Управление температурой нагрева воздуха (мощностью), осуществляется с помощью двух круглых регуляторов, расположенных на верхней части прибора. На одном можно установить нужный режим, на втором регулировать температуру в диапазоне от 5 до 26 ºС. Безопасность в процессе эксплуатации представленной серии, подтверждается лабораторными измерениями температуры нагрева поверхности корпуса, которая составляет не более 60°С, а II-й класс электрозащиты не нуждается в отдельном заземлении и способен выдерживать значительные перепады напряжения в электросети от 150 до 240В, что позволяет оставлять обогреватель включенным в течении длительного периода беспрерывной работы.

Брызгозащитное исполнение нагревательного элемента IР 24, дает возможность использовать обогреватель Noirot Spot E-3 Plus 1000 в помещениях с высокой влажностью (ванная комната, банный комплекс, бассейн и т.д.). Страна производства — Франция.

Отличительные особенности конвектора Noirot серии Spot E-3 Plus 1000:

• Надежный термостат, с точной поддержкой температурных параметров установленных пользователем;
• Высочайший уровень безопасности и надежности в период всего срока эксплуатации прибора;
• Конвектор, относящийся по своим характеристикам к оборудованию премиум-класса;
• Уникальный по своей надежности нагревательный элемент RX-Silence Pluse;
• Идеальная циркуляция теплого воздуха, при конвективном нагреве;
• Возможность настенной и напольной установки;
• Продукция европейского качества и сборки;
• Поставляются с евровилкой в комплекте;
• Высококачественные комплектующие.

Конвектор Noirot Spot E-3 Plus 1000 — лучшее соотношение доступной цены и высочайшего качества сборки. Прибор способный обеспечивать теплом Ваш дом достаточно длительный период времени, не менее 25 лет.

Технические характеристики — Конвектор NOIROT Spot E-3 Plus 1500

Мощность, Вт

1500

Вид термостата

Рекомендуемая площадь, м2

20

Способ установки

напольный / настенный

Напряжение сети, В

220

Степень защиты

IP 24

Страна производства

Франция

Родина бренда

Франция

Гарантия

2 года

Регулировка мощности нагрева

есть

Защита от перегрева

Тип нагревательного элемента

монолит

Быстрый нагрев

нет

Отключение при перегреве

есть

Ионизатор воздуха

нет

Количество режимов нагрева

2

Защита от воды

Энергосбережение

Электрообогреватель Noirot Spot E-5 Plus 2000

Артикул: нет

Электрический обогреватель Noirot Spot E-5 750

Spot Е-5 750 — это электрический обогреватель конвективного типа. Вся конструкция прибора направлена на равномерное распределение тепла для обогрева с максимальным комфортом. Устройство работает по принципу естественной конвекции. Холодный воздух, проходя через конвектор и его нагревательный элемент, нагревается и выходит сквозь решетки-жалюзи, незамедлительно начиная обогревать помещение. Электрический обогреватель Spot Е-5 750 — это шаг к экономии, независимости и комфорту. Высокотехнологичный прибор будет надежным источником тепла везде, где найдется немного свободного места на стене или, при установке устройства на специальные ножки, на полу. Конвектор обеспечит необходимым теплом во время холодной зимы или прохладным летним вечером. Это идеальный вариант для дополнительного обогрева помещения в период межсезонья.

Конструктивные особенности конвектора исключают возникновение посторонних шумов при нагреве и остывании и гарантируют полную безопасность в эксплуатации. Электронная автоматика выдерживает перепады напряжения от 150 В до 242 В, что наиболее актуально при частых «скачках» напряжения. На случай возможных перебоев с электропитанием в обогревателе предусмотрена функция авторестарта, восстанавливающая работу прибора в прежнем режиме. Обогреватель имеет II класс электрозащиты, не требует специального подключения к электросети и не нуждается в заземлении, что позволяет оставлять его включенным 24 часа в сутки. При точном соблюдении правил эксплуатации исключена любая возможность воспламенения. Spot E-5 750 выполнен в брызгозащищенном исполнении (IP 24) и может применяться даже во влажных помещениях.

Представляем вам весь модельный ряд Noirot Spot E-5:

 

	Влагозащита класса IP 24 Благодаря применению технологий все серии обогревателей и полотенцесушителей выполнены в брызгозащищенном исполнении, что позволяет эксплуатироваться во влажных помещениях.
	Точный термостат ASIC Он поддерживает температуру от 4 до 30С с точностью до 0,1С. Каждые 47 секунд датчик считывает t входящего воздуха и дает сигнал о включении нагревательного элемента, что способствует экономии электроэнергии.
	Безопасность для детей Поверхность прибора не нагревается выше 60°С.  Двойная изоляция корпуса приборов полностью предотвращает любую возможность обжечься. Электрообогреватель может быть установлен в детской комнате.

Управление

В обогревателях серии Spot E-5 применен новейший электронный блок управления с дисплеем. Он позволяет с точностью до градуса выставить желаемый температурный режим. Обогреватели серии Spot Е-5 оснащены электронным цифровым термостатом ASIC®, который поддерживает температуру с точностью до 0,1°С. Высокая точность поддержания температуры, а также низкая потребляемая мощность в режиме ожидания (не более 0,5 Вт) приводят к экономии электроэнергии, увеличению срока службы прибора и созданию максимального комфорта в помещении без скачков температуры.

Подробнее о термостате ASIC® Абсолютно во всех приборах применяется высокотехнологичный электронный цифровой термостат ASIC, предназначенный для регулирования температуры воздуха. ASIC поддерживает заданную температуру в помещении в диапазоне от 4 до 30°С, с точностью до 0,1°С, гарантируя максимально комфортный микроклимат. Каждые 47 секунд термодатчик, считывает температуру входящего воздуха и подает сигнал на термостат, который в свою очередь включает нагревательный элемент или переходит в режим ожидания. Точность поддержания температуры приводит к экономии электроэнергии, увеличению срока службы прибора и созданию максимального комфорта в помещении без скачков температуры. Датчик термостата защищен от высокой температуры нагревательного элемента специальным теплоотражающим экраном.
 

		Электронный термостат ASIC® Электронный термостат ASIC поддерживает заданную температуру с точностью до 0,1°С, автоматически включая и отключая нагрев.
		Окраска корпуса Прочная полимеризованная эпоксидная окраска корпуса защитит прибор от неблагоприятных воздействий и сохранит его первоначальный внешний вид на долгие годы
		RX-Silense PLUS® Цельнолитой монометаллический нагревательный элемент RX-Silence PLUS® быстро и абсолютно бесшумно нагревает воздух и прекрасно поддерживает тепловой баланс в отапливаемом помещении.

 

Преимущества электроообогревателя Noirot применяемого в таких помещениях как:
КВАРТИРА ЗАГОРОДНЫЙ ДОМ ДЕТСКАЯ КОМНАТА	БОЛЬНИЦА ДЕТСКИЙ САД ШКОЛА ОФИС	ГАРАЖ БАССЕЙН БАЛКОН	В ВАННОЙ КОМНАТЕ ПРЕДБАННИКЕ БАНИ

Для помещения площадью	20 м², 25 м²
Мощность, кВт	2
Таймер	Нет
Термостат	Электронный
Габариты (ШхВхГ) мм	740х440х80
Вес. кг	6,6

Назад

Конвектор 221133 Spot E-5 1000

Внимание! Для полноценной работы сайта необходимо включить в браузере поддержку JavaScript.
Как это сделать? Москва Связаться с нами

Режим работы
10:00 — 18:00

• Код товара: 548423
• Артикул: HYh217.3FDFS

В избранное

Сравнить

Коротко о товаре: электронный термостат, дисплей, вилка

Все характеристики

---

В избранное

Сравнить

Конвектор 221133 Spot E-5 1000

• Описание
• Характеристики
• Отзывы

• Описание
• Характеристики
• Отзывы
• Похожие товары

221133 Spot E-5 1000 сертифицирован для продажи в России.

Конвектор 221133 Spot E-5 1000 – фото, технические характеристики, условия доставки по Москве и России. Для того, чтобы купить конвектор 221133 Spot E-5 1000 в интернет-магазине Xcom-shop.ru, достаточно заполнить форму онлайн заказа или позвонить по телефонам: +7 (495) 799-96-69, +7 (800) 200-00-69.

Изображения товара, включая цвет, могут отличаться от реального внешнего вида. Комплектация также может быть изменена производителем без предварительного уведомления. Данное описание и количество товара не является публичной офертой.

Spotify Technology S.A. (SPOT) Цена акций, новости, котировки и история

NYSE — Цена с задержкой на NYSE. Валюта в долларах США

247,76 + 1,75 (+ 0,71%)

При закрытии: 16:00 EDT

Полный экран

Торговые цены поступают не со всех рынков

Предыдущее закрытие	246,01
Открыто	247.01
Ставка	241,00 x 900
Спрос	248,84 x 1100
Дневной диапазон	245.42 — 254,94
Диапазон за 52 недели	201,68 — 387,44
Объем	1,512,786
Ср. Объем	1 504 301

Рыночная капитализация	47.41B
Бета (5-летняя ежемесячная)	1,51
PE Ratio (TTM)	N / A
EPS ( TTM)	-1,93
Дата прибыли	27 октября 2021 г. — 1 ноября 2021 г.
Форвардные дивиденды и доходность	Н / Д (Н / Д)
Дата без учета дивидендов	Н / Д
1 год Target Est	311.38

Откройте для себя новые инвестиционные идеи, получив доступ к объективным и глубоким инвестиционным исследованиям

Coal India вводит специальную схему спотовых электронных аукционов для снижения зависимости от импорта

KOLKATA: представила специальную схему спотовых электронных аукционов для импортеры для увеличения продаж и снижения зависимости Индии от импорта. Покупатели, в том числе трейдеры, импортировавшие уголь после марта 2018 года, имеют право участвовать в торгах по этой схеме.

В уведомлении Coal India говорится: «Схема специальных спотовых электронных аукционов 2020 для замещения импорта (только для импортеров угля) вводится… для достижения« Атма Нирбхарта ».Распределение угля по этой схеме… направлено на обеспечение доступа к местному углю… импортерам. Такие импортеры могут импортировать уголь для собственного потребления или для продажи в Индии ».

Coal India скоро уведомит о событиях электронных аукционов на период с августа 2020 года по март 2021 года в рамках схемы, а угольные компании разработают специальные программы для электронных аукционов.

Покупатель может поднять всего 25 000 тонн по схеме, если доставка осуществляется грузовиками, и может выбрать дополнительные партии по 1 000 тонн.В случае, если уголь поставляется товарными поездами, минимальная заявка будет составлять 50 000 тонн, что эквивалентно пропускной способности 12 товарных поездов. Дополнительные заявки должны быть 4000 тонн или один поезд.

Претендентам необходимо для начала указывать цены с шагом в 10 рупий за тонну сверх минимальной цены. Она будет увеличиваться до 20, 30 и 50 рупий за тонну постепенно по мере усиления конкуренции. Схема предложит покупателям возможность выкачать уголь в течение трех, шести или 12 месяцев.

По данным Coal India, несколько неэлектростанций импортируют уголь из разных стран для смешивания или прямого использования. В недавнем информационном письме компании говорится, что возникла потребность в потреблении местного угля вместо импортного для экономии иностранной валюты, поскольку у Coal India имеется достаточное количество местного угля.

В настоящее время запасы Coal India находятся на рекордно высоком уровне в 75 миллионов тонн, а запасы на электростанциях достигли 44 миллионов тонн.

Coal India в настоящее время ведет переговоры с предприятиями по производству губчатого железа, цемента и внутренними электростанциями о предложении угля на основе импортозамещения.Шахтер вместе с министерством угля решили снизить импорт с целью доведения до нуля в этом году. План состоит в том, чтобы связаться с потребителями для замены долгосрочных импортных требований.

Справочник по электронному обучению и торговле | EPEX SPOT

Наши учебные курсы разработаны экспертами и сочетают в себе знания EPEX SPOT и внешних специалистов. Учебные программы представляют собой интерактивные курсы на английском, немецком и французском языках, открытые для всех, кто хочет больше узнать о рынках электроэнергии.

После подписки вы получите неограниченный доступ к обучающей платформе сроком на один год. Доступ к порталу можно получить из любого места и в любое время через компьютер или планшет с доступом в Интернет.

Вы можете подписаться на наши учебные модули онлайн в интернет-магазине EEX Group.

Щелкните здесь, чтобы получить доступ к платформе электронного обучения.

Темы, охватываемые нашими учебными модулями

Основы энергосистемы

Эта серия учебных модулей охватывает основных вопросов , связанных с энергосистемой, выработкой и потреблением электроэнергии .Вы найдете объяснения динамики спроса и предложения, их влияние на цены и баланс, экономическую организацию и эксплуатационные характеристики энергосистемы. Узнайте об основах производства электроэнергии, роли и технических характеристиках генерирующих единиц, а также о влиянии на стоимость энергии и цены на электроэнергию. Вы также сможете лучше понять закономерности энергопотребления с течением времени, влияние погоды, структуру тарифов или основные события в СМИ.Дан обзор потенциального воздействия электромобилей и политики энергоэффективности, чтобы упомянуть лишь несколько тем.

Рынки и торговля

Эти модули посвящены рынкам электроэнергии и торговле электроэнергией , с обзором типов обменов, вовлеченных сторон, характеристик продуктов, торговли, результатов рынка, расчетов и поставок. Он объясняет функционирование Market Coupling , вовлеченных игроков, его принципы и преимущества.Кроме того, включено краткое описание алгоритма EUPHEMIA, используемого для расчета рыночных цен в Европе.

Он также дает представление о методах расчета пропускной способности межсетевых соединений и объясняет основы методологии Flow-Based . Эта серия включает тематические исследования, примеры оперативной торговли и поведение цен. В нем объясняется функционирование механизма мощности , включая обязательства поставщиков и распределение кредитов мощности.

Справочник по трейдингу для лиц, не являющихся членами , также доступен в рамках этой серии тренингов: он дает подробную информацию об операционных аспектах энергетического рынка, правилах, регулировании, продуктах, рынках, включая тематические исследования, примеры торговли, поведение цен и основы механизма Емкости. Кроме того, описывается функционирование клиринга и роль ECC как центрального контрагента.

Потоковая методология

Серия из четырех учебных модулей по методологии потоков была разработана в сотрудничестве с французским оператором системы передачи данных Rte.
Серия начинается с базового введения, которое поможет «освежить свои знания об TSO и УВД». Вы найдете ответы на такие вопросы, как: какова роль TSO , как они рассчитывают и распределяют трансграничную пропускную способность и каковы временные рамки их деятельности?

Второй учебный курс углубляется в тему. «Понимание методологии , основанной на потоках. » дает ответы на основные вопросы: каковы общие концепции, в чем разница между физическими и коммерческими потоками, что такое чистые позиции и PTDF?

«Узнайте больше о расчете пропускной способности на основе потока »: в рамках этого третьего тренинга основное внимание уделяется расчету данных, предоставленных TSO, мониторингу критических элементов, PTDF и GSK, теневым аукционам, внутридневным ATC, гибридному ценообразованию и многому другому. более.

Завершите серию «Уловите параметры , основанные на потоке, и их влияние на трейдеров». Этот курс дает сравнение до и после введения методологии, основанной на потоках, подчеркивает влияние на рыночную связь и торговлю мощностями и описывает особенности формирования рыночной цены в условиях ограничений, основанных на потоках.

Хотели бы вы проверить свои текущие знания о методологии потока? Нажмите здесь, чтобы пройти короткую викторину!

YtfK активирует строгий ответ, запуская алармон-синтетазу SpoT в Escherichia coli

Бактериальные штаммы и плазмиды

Бактериальные штаммы и плазмиды перечислены в дополнительной таблице 1 и дополнительных данных 1 соответственно.Олигонуклеотиды ДНК перечислены в дополнительных данных 2.

MG1655 Конструкция YtfK :: mNeonGreen

Хромосомное слияние YtfK :: mNeonGreen было получено с помощью рекомбинации с лямбда-красным, адаптированной из Blank et al. ⁵² . Фрагмент ДНК амплифицировали с помощью ПЦР с использованием праймеров pEJM230 / 231 с плазмидой pWRG100 в качестве матрицы ⁵² . Полученный продукт ПЦР электропорировали в клетки MG1655 через 1 час экспрессии лямбда-рекомбиназы из плазмиды pKD46 ⁵³ .Через 1 час фенотипической экспрессии клетки высевали на питательный агар (NA), содержащий 25 мкг / мл хлорамфеникола. Отобранные колонии содержали кассету ytfK :: sce-I :: cm , которую затем вновь трансдуцировали в клетки MG1655, несущие плазмиду pWRG99 ⁵² . Затем кассету с хлорамфениколом удаляли счетным отбором с использованием рекомбинации лямбда-красного для вставки продукта ПЦР, комплементарного фланкирующим областям кассеты sce -I :: см на хромосоме.Продукт ПЦР был получен с использованием праймеров pEJM244 / 245 на pJF119EH, кодирующих mNeonGreen в качестве матрицы (щедрый подарок от лаборатории Axel Magalon). Затем продукт ПЦР электропорировали в MG1655 ytfK :: sce -I :: см , экспрессирующую лямбда-рекомбиназу из pWRG99 ⁵² , и после 1 часа фенотипической экспрессии серийно разбавляли и высевали на NA, содержащую 100 мкг / мл ампициллина. и 1 мкг / мл ангидротетрациклина. pWRG99 также кодирует мегануклеазу I-Sce-I под контролем индуцибельного промотора ангидротетрациклина (aTc).Правильная интеграция mNeonGreen была подтверждена диагностической ПЦР, а затем секвенирована.

Конструкция плазмиды

pEG25 relA и spoT : Из-за своей внутренней активности перепроизводство RelA и SpoT становится токсичным. Чтобы обойти эту проблему и, следовательно, иметь возможность экспрессировать relA в штамме Δ relA spoT , мы разработали надежную систему для жесткой регуляции внутриклеточного уровня RelA. Сначала мы сконструировали плазмиду pEG25, которая содержит промотор Pt5 из pCA24N.Этот промотор содержит три оператора Lac и, следовательно, менее подвержен утечкам (см. Ниже). Что наиболее важно, мы поиграли с константами, которые участвуют в процессе инициации трансляции. Действительно, создав последовательность Шайна-Дальгарно, инициирующий кодон и спейсер между ними, мы смогли жестко регулировать внутриклеточный уровень RelA (SD4 TTG) и SpoT (SD8 TTG). Выбранные последовательности Шайна-Дальгарно описаны в списке праймеров.

pEG25: производное pMG25, где промотор P _Lac был заменен на P _t5 из pCA24N ²⁶ .Промотор P _t5 был амплифицирован с помощью ПЦР с использованием праймеров EG186 / EG187, расщеплен XhoI и EcoRI и лигирован в плазмиду, расщепленную теми же ферментами.

производных pEG25: вставленные гены были амплифицированы с помощью ПЦР из хромосомной ДНК и с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплены EcoRI и BamHI и лигированы в pEG25, расщепленном теми же ферментами.

pBbS2K: Исходная плазмида pBbS2K (RFP) была расщеплена BglII / BamHI, а затем самолигирована.Полученную плазмиду затем использовали в качестве отрицательного контроля.

Плазмиды производных pBbS2K (RFP): вставленные гены были амплифицированы с помощью ПЦР из хромосомной ДНК с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплены EcoRI / BamHI и лигированы в плазмиду pBbS2K (RFP), расщепленную теми же ферментами.

pEG220: pNDM220 (Amp) был сконструирован и модифицирован в плазмиду канамицина. Кассета канамицина была амплифицирована из pKD4 с использованием pEG287 / 288 и трансформирована в штамм DY331 с системой рекомбинации лямбда-красного на хромосоме.Замена кассеты с антибиотиком была проверена с помощью ПЦР, а затем секвенирована.

Плазмиды, производные

pUT18C: вставленные гены были амплифицированы с помощью ПЦР из хромосомной ДНК (или мутированной плазмиды) с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплены XbaI и KpnI и лигированы в pUT18C, расщепленные теми же ферментами.

Плазмиды, производные

pKT25: вставленные гены амплифицированы с помощью ПЦР из хромосомной ДНК (или из мутированной плазмиды) с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплены XbaI и KpnI и лигированы в pKT25, расщепленные теми же ферментами.

pET28a + -TRX: последовательность TRX, включая тиоредоксин-6his-tev , была амплифицирована из pLic07 с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплена NcoI и BamHI и лигирована в pET28a +, расщепленная теми же ферментами.

pET28a + — ytfK : Ген ytfK был амплифицирован из хромосомной ДНК E. coli с праймерами, перечисленными в дополнительных данных 2, расщеплен BamHI и HindIII и лигирован в pET28a + -TRX, расщепленный теми же ферментами .

Среды и антибиотики

Бульон Лурия-Бертани из OXOID (LP0021B; LP0042B) получали, как описано ранее ⁵⁴ . Минимальную среду MOPS готовили, как описано ранее ⁵⁵ , и в нее добавляли 2 мМ фосфата (или 0,4 мМ фосфата для равномерного мечения P ³² ), 0,2% глюкозы и 40 мкг / мл (каждой) из 20 аминокислот. . Превосходный бульон (TB): 1,2% пептона, 2,4% дрожжевого экстракта, 72 мМ K ₂ HPO ₄ , 17 мМ KH ₂ PO ₄ и 0.4% глицерин.

Богатая твердая среда, использованная в этом исследовании, представляет собой NA от Oxoid (CM0003B). Минимальная среда M9: соль M9 ​​(60 мМ Na ₂ HPO ₄ ; 22 мМ KH ₂ PO ₄ ; 8 мМ NaCl; 20 мМ NH ₄ Cl) ​​1 мМ MgSO ₄ ; 100 мкМ CaCl ₂ ; тиамин 1 мкг / мл; 0,2% глюкозы. Твердая минимальная среда SMG: среда M9 с добавлением 40 мкг / мл L-серина; 40 мкг / мл L-метионина; 40 мкг / мл глицина; и 15 г / л агара.

При необходимости в среду добавляли антибиотик (50 мкг / мл ампициллина; 50 мкг / мл хлорамфеникола; 25 мкг / мл канамицина).Экспрессию белка из плазмид, несущих промотор P _Lac , индуцировали добавлением IPTG.

Подавление фенотипа отсутствия роста

ΔrelA на SMG

Объединенная смесь 6His-меченных генов (минус GFP) плазмидная библиотека ASKA ²⁶ была трансформирована в штамм с делецией Δ relA . Затем клетки распределяли по пластинам SMG с добавлением хлорамфеникола и различных концентраций IPTG (0, 100 и 200 мкМ) для индукции экспрессии генов, кодируемых плазмидой ASKA, и инкубировали в течение 36 часов при 37 ° C.Плазмиды, которые продуцировали колонии в этом непермиссивном состоянии, были секвенированы, и мы идентифицировали ytfK , metL , sdaB , ymgB , yaaA , thil, murI и relA в качестве генов-кандидатов. в штамме ΔrelA при высокой концентрации серина, метионина и глицина (SMG) ²⁵ .

Бактериальный двугибридный as

s ay (BTH)

Мы использовали анализ BTH для тестирования межбелкового взаимодействия in vivo.Этот метод основан на восстановлении аденилатциклазы из Bordetella pertussis ⁴¹ . Представляющие интерес белки были слиты с фрагментами Т18 и Т25 аденилатциклазы с использованием pUT18c и pKT25. После совместной трансформации штаммом BTh201 планшеты инкубировали в течение ночи при 30 ° C. Колонии повторно штриховали в течение ночи при 30 ° C. Затем утром инокулировали 1 мл LB с ампициллином и канамицином и инкубировали при 30 ° C при встряхивании в течение 8 часов. Затем в общей сложности 5 мкл неразбавленных культур наносили на чашки с агаром для NA с добавлением 40 мкг / мл X-Gal с различными концентрациями IPTG.Для экспериментов с β-галактозидазой использовали тот же посевной материал, и активность β-галактозидазы определяли, как описано Миллером, с использованием микропланшетного ридера TECAN для отслеживания OD ₆₀₀ и OD ₄₂₀ с течением времени.

Скрининг на потерю взаимодействия с помощью случайного мутагенеза

ytfK Плазмида

pUT18c- ytfK была случайным образом мутагенизирована путем размножения в мутаторном штамме XL1-Red от Agilent Technologies. Штамм XL1-Red не имеет трех основных путей репарации ДНК ( mutS, mutD и mutT) .Затем BTh201, несущий pKT25 -spoT , трансформировали полученной библиотекой мутантных плазмид pUT18c- ytfK и подвергали скринингу на планшетах X-Gal. Отбирали и секвенировали белые колонии.

In vivo (p) измерение ppGpp

(p) накопление ppGpp измеряли в клетках, выращенных и равномерно меченных ³² P в минимальной среде MOPS с добавлением, как описано ниже. Всего в указанные моменты времени отбирали 100 мкл образцов и добавляли 40 мкл 21 М муравьиной кислоты для остановки реакции.Затем образцы оставляли на льду на 20 минут и центрифугировали при 14000 г в течение 20 минут при 4 ° C. В целом, 5 мкл каждого образца загружали на планшеты для ТСХ с целлюлозой PEI (приобретены у MercK-Millipore). Планшеты были обнаружены с помощью PhosphoImaging (GE Healthcare) и проанализированы с помощью программного обеспечения ImageQuant (GE Healthcare). Количественный анализ проводили с использованием программного обеспечения FIJI. Уровни ppGpp были нормализованы к уровню штамма WT в нулевой момент времени для каждого условия голодания.

Для фосфатного голодания ночные культуры выращивали в MOPS 2 мМ фосфата с добавлением 40 мкг / мл 20 аминокислот и 0.2% глюкоза. Затем ночные культуры разводили в 1/100 раз в той же среде и инкубировали при 37 ° C со встряхиванием до OD ₆₀₀ : 0,4–0,5. Клетки собирали и промывали один раз в MOPS без фосфата, а затем ресуспендировали в MOPS с 50 мкМ фосфата и метили 150 мкКи ³² P.

Для жирнокислотного голодания ночные культуры выращивали в MOPS 2 мМ фосфата с добавлением 40 мкг / мл 20 аминокислот и 0,2% глюкозы. Затем ночные культуры разводили 1/100 раз в той же среде с 0.4 мМ фосфата вместо 2 мМ и инкубировали при 37 ° C при встряхивании до OD ₆₀₀ : 0,4–0,5. Затем клетки разбавляли до OD ₆₀₀ : 0,05 в той же среде, метили 150 мкКи ³² P и увеличивали до OD ₆₀₀ : 0,25. Затем индуцируют голодание по жирным кислотам путем добавления 250 мкг / мл церуленина.

Для аминокислотного голодания клетки выращивали в MOPS 2 мМ фосфата с добавлением 0,2% глюкозы без аминокислот. Затем ночные культуры разводили 1/100 раз в той же среде с 0.4 мМ фосфата вместо 2 мМ и инкубировали при 37 ° C при встряхивании до OD ₆₀₀ : 0,4–0,5. Затем клетки разбавляли до OD ₆₀₀ : 0,05 в той же среде, метили 150 мкКи ³² P и увеличивали до OD ₆₀₀ : 0,25. Затем индуцируют аминокислотное голодание добавлением 500 мкг / мл L-валина.

Для сверхэкспрессии yfK , штамм WT и мутант Δ relA , несущий pEG25 ytfK или pEG25 ytfK — 6his и pEG25 ytfK ytfK ytfK ytfK ⁹⁰² — 6his выращивали в MOPS 2 мМ фосфата с добавлением 40 мкг / мл 20 аминокислот и глюкозы 0.2%. Ночные культуры разводили в 1/100 раз в 0,4 мМ фосфата MOPS и инкубировали при 37 ° C при встряхивании до OD ₆₀₀ : 0,4–0,5. Затем клетки разбавляли до OD ₆₀₀ : 0,05 в той же среде, метили 150 мкКи ³² P и увеличивали до OD ₆₀₀ : 0,25. Затем экспрессию ytfK индуцировали добавлением 1 мМ IPTG.

Толерантность церуленина к антибиотикам

Штаммы WT, Δ relA , Δ ytfK , Δ relA ytfK , Δ relA spoT , ΔrelA ytfK , несущий 9016 ΔRelA ytfK , содержащий pB ПЭГ ₂₂₀ — ytfK были протестированы на эффект 500 мкг / мл церуленина.Ночные культуры разводили в 1000 раз в 10 мл свежей среды LB и инкубировали ~ 2,5 ч при 37 ° C при встряхивании (обычно достигая 1-2 × 10 ⁸ клеток / мл). Для анализа комплементации в среду добавляли 25 мкг / мл канамицина. Затем аликвоты по 1 мл переносили в пробирку Falcon на 15 мл, содержащую 10 мкл церуленина 50 мг / мл, и инкубировали 4 ч при 37 ° C при встряхивании. Для определения КОЕ отбирали аликвоты по 200 мкл, клетки собирали, ресуспендировали в свежей среде, серийно разбавляли и высевали на твердую среду NA.Выжившую фракцию рассчитывали путем деления количества КОЕ / мл в культуре после 4 ч инкубации с церуленином на количество КОЕ / мл в культуре перед добавлением церуленина.

Толерантность к ампициллину после предварительной обработки церуленином

WT, Δ relA , Δ ytfK , Δ relA ytfK и Δ ytfK , несущий pEG _{220 , содержащий pEG 220 pEG -ytfK были заражены против обработки ампициллином (100 мкг / мл) после предварительной обработки 250 мкг / мл церуленина для индукции синтеза (p) ppGpp в зависимости от SpoT.Ночные культуры разводили в 1000 раз в 10 мл свежей среды LB и инкубировали около 2,5 ч при 37 ° C при встряхивании (обычно достигая 1-2 × 10 ⁸ клеток / мл). Для анализа комплементации в среду добавляли 25 мкг / мл канамицина. Затем аликвоты по 3 мл переносили в 50-мл пробирку Falcon, содержащую 15 мкл церуленина 50 мг / мл, инкубировали в течение 30 мин при 37 ° C при встряхивании, а затем обрабатывали в течение 4 ч ампициллином (100 мкг / мл). Для определения КОЕ в указанные моменты времени отбирали аликвоты по 800 мкл, клетки собирали, ресуспендировали в свежей среде, серийно разбавляли и высевали на твердую среду NA.Выжившую фракцию рассчитывали путем деления количества КОЕ / мл в культуре после 4 ч инкубации с ампициллином на количество КОЕ / мл в культуре перед добавлением ампициллина.}

Продукция белка

Для продукции SpoT ^1–378 и RelA ^1–396 (каталитические домены) компетентные клетки BL21 (DE3) трансформировали с помощью pMG25-SpoT ^1–378 -6His или pEG25-RelA ^1–396 -6 Его и высевают на чашки с NA, содержащие 100 мг / л ампициллина.Собирали несколько колоний и инокулировали 100 мл LB, содержащего 100 мг / л ампициллина. Культуры выращивали при встряхивании при 30 ° C в течение ночи. Ночные культуры диспергировали как инокулят из аликвот по 20 мл в 1 л среды TB с 100 мг / л ампициллина и встряхивали при 30 ° C до тех пор, пока OD ₆₀₀ не достигала 0,5, затем клетки индуцировали 0,5 мМ IPTG и инкубировали при 30 ° C. C в течение 4 ч.

Для продукции YtfK компетентные клетки BL21 (DE3) трансформировали плазмидой pET28a- ytfK и высевали на планшеты с NA с 50 мг / л канамицина.Отбирали несколько колоний и инокулировали в 100 мл LB, содержащего 50 мг / л канамицина. Культуры выращивали при встряхивании при 30 ° C в течение ночи. Ночные культуры диспергировали как посевной материал из аликвот по 20 мл в 1 л среды LB в присутствии 50 мг / л канамицина и встряхивали при 30 ° C до OD ₆₀₀ 0,4 единицы, затем клетки индуцировали 0,5 мМ IPTG и инкубировали при 20 ° C. ° C в течение 4 ч.

Наконец, клетки центрифугировали при 9000 × g в течение 20 мин при 4 ° C. Осадок сухих клеток хранили при -80 ° C.

Очистка белка

Для очистки YtfK клетки собирали из 4 л культуры, суспендировали в буфере для лизиса (трис-HCl 50 мМ, pH 8,0, NaCl 300 мМ, ЭДТА 1 мМ, лизоцим 0,5 мг / мл, фенилметилсульфонилфторид (PMSF)) , ДНКаза 20 мкг / мл и MgCl ₂ 20 мМ. Смесь инкубировали в течение 1 ч при 4 ° C при осторожном встряхивании, а затем подвергали двум циклам стадий лизиса по Френч-прессу. Растворимую фракцию получали центрифугированием в течение 30 мин при 200000 × g .Рекомбинантные белки очищали с помощью ионно-металлической аффинной хроматографии с использованием никелевой колонки емкостью 5 мл (HiTrap ^HP ) на ÄKTA pure 25 (GE healthcare), предварительно уравновешенной трис-HCl 50 мМ pH 8,0, 300 мМ NaCl, 10 мМ имидазолом. (буфер A). После нескольких промывок в буфере A, 6 × His-меченые белки были элюированы в буфере A с добавлением 250 мМ имидазола и немедленно обессолены с использованием обессоливающей колонки Hiprep 26/10, предварительно уравновешенной буфером A. Полученные обессоленные белки были смешаны с 0.2 мг / мл протеазы TEV и инкубируют в течение 2 часов при комнатной температуре, а затем загружают на колонку HisTrap ^TM , предварительно уравновешенную в буфере A, который избирательно удерживает TEV, TRX, нерасщепленные белки и примеси. Немеченый YtfK собирали в проточном потоке, концентрировали на Centricon (Millipore; отсечка 3 кДа) и пропускали через колонку HiLoad 16/600 Superdex 200, предварительно уравновешенную 50 мМ трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 500. мМ KCl, 2 мМ β-меркаптоэтанол, 2% глицерин. Чистоту препаратов YtfK оценивали с помощью SDS-PAGE (дополнительный рис.8а, б) и спектрофотометрически отношение [OD260 / OD280] ниже 0,52.

Для очистки SpoT ^1–378 и RelA ^1–396 клетки собирали из 4 л культуры, затем осадок клеток ресуспендировали в буфере для лизиса, состоящем из 50 мМ трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 10 мМ имидазола. , 2 мМ β-меркаптоэтанол, 0,5% CHAPS, 2% глицерин, 1 мМ EDTA, 0,5 мг / мл лизоцима, 1 мМ фенилметилсульфонилфторид, 20 мкг / мл ДНКазы и 20 мМ MgCl ₂ . Смесь инкубировали 1 ч при 4 ° C при осторожном встряхивании.Дальнейший этап лизиса French-Press был выполнен для обеспечения полного лизиса клеток. Осадок и растворимые фракции разделяли центрифугированием в течение 30 мин при 20000 × g . Растворимую фракцию, содержащую белки SpoT ^1–378 или RelA ^1–396 , загружали при комнатной температуре в никелевую колонку емкостью 5 мл (HiTrap ^HP ), используя прибор ÄKTA pure 25 (GE healthcare), предварительно уравновешенный равновесный буфер 50 мМ Трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 10 мМ имидазол, 2 мМ β-меркаптоэтанол, 2% глицерин и иммобилизованные белки элюировали в элюирующем буфере 50 мМ Трис-HCl pH 8.0, 500 мМ NaCl, 500 мМ имидазол, 2 мМ β-меркаптоэтанол и 2% глицерин. Элюированные белки немедленно подвергали очистке с помощью эксклюзионной хроматографии (SEC) с использованием колонки HiLoad 26/600 Superdex 200 пг, предварительно уравновешенной 50 мМ трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 500 мМ KCl, 2 мМ β-меркаптоэтанолом, и глицерин 2%.

Чистоту препаратов SpoT и RelA оценивали с помощью SDS-PAGE (дополнительный рис. 8c-e) и спектрофотометрически отношения [OD260 / OD280] ниже 0,61 для SpoT и ниже 0.57 для RelA.

Биослойная интерферометрия (BLI)

YtfK биотинилировали с использованием набора EZ-Link NHS-PEG4-Biotin (Perbio Science, Франция) с соотношением YtfK и биотина 1: 1 при 4 ° C соответственно. Реакцию останавливали, удаляя избыток биотина с помощью колонки Zeba Spin Desalting (Perbio Science, Франция). BLI-исследования проводили при 25 ° C на аппарате Blitz (ForteBio, США) со встряхиванием при 2200 об / мин со следующими этапами; 30 с базовый уровень, 90 с ассоциация и 90 с диссоциация.Наконечники стрептавидинового биосенсора (ForteBio, США) сначала гидратировали 0,2 мл 50 мМ трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 500 мМ KCl, 2 мМ β-меркаптоэтанола, 2% глицерина в течение 10 мин, а затем загружали 2,5 мкМ. биотинилированного YtfK в том же буфере. Чтобы изучить связывание YtfK с SpoT ^1–378 или RelA ^1–396 , увеличение концентрации SpoT ^1–378 (от 5 до 80 мкМ) или RelA (от 40 до 120 мкМ) в буфере взаимодействия (50 мМ) Использовали трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 500 мМ KCl, 2 мМ β-меркаптоэтанол, 2% глицерин и 1 мг / мл БСА), а фазы ассоциации и диссоциации контролировали, соответственно, при постоянном перемешивании при 22:00. об / мин.Чтобы избежать неспецифического связывания SpoT ^1–378 или RelA ^1–396 со стрептавидиновыми биосенсорами, биосенсоры инкубировали с 10 мкг / мл биоцитина в буфере взаимодействия (50 мМ трис-HCl pH 8,0, 500 мМ NaCl, 500 мМ KCl, 2 мМ β-меркаптоэтанол, глицерин 2% БСА 1 мг / мл) в течение 90 с. Во всех экспериментах программное обеспечение BLItz Pro ^TM выполняло референсное вычитание ответа белка SpoT ^1–378 (или RelA ^1–396 ) на биосенсорах без покрытия для каждой тестируемой концентрации.Константы диссоциации (K _D ), то есть сродство YtfK к SpoT, оценивали с помощью программного обеспечения GraphPad Prism 5.0 на основе максимальных ответов в нм при 110 с, напрямую связанных с концентрацией SpoT ^1–378. . K _D был оценен путем нанесения на ось x разной концентрации SpoT ^1–378 и различных ответов SpoT ^1–378 (за 10 с до окончания ассоциации) на y — ось.Для расчета K _D была использована нелинейная регрессия для анализа xy с одним сайтом (специфическое связывание) в качестве модели, которая соответствует уравнению y = Bmax × x / (K _D + х ).

Вестерн-блот-анализ

Вестерн-блоттинг с использованием Penta-His-HRP-конъюгированного против 6His-меченых белков был проведен в соответствии с рекомендациями компании (Qiagen ref: 34460). Клетки выращивали экспоненциально при 37 ° C в LB (OD ₆₀₀ 0.5), затем клетки индуцировали 200 мкМ IPTG в течение 1 ч. Был подготовлен образец, и равное количество общих белков было загружено на дорожку на SDS-PAGE. Иммуноблот-анализ проводили с антителом, разведенным 1/10 000, и визуализировали с использованием субстрата luminata crescendo HRP (ссылка Millipore: WBLUR0100) и ImageQuant Las4000 (GE Healthcare).

Вестерн-блоттинг с использованием антитела против cyaA против белка аденилатциклазы, кодируемого плазмидой pUT18c, был проведен с использованием PBS + 0,1% Tween20 (PBST) для всех этапов иммуноблоттинга.Мембрану инкубировали в блокирующем буфере в течение 1 ч (PBST + 5% молоко). Первое антитело против cyaA разводили 1/5 000 (Santa Cruz, ref: sc-13582) в молоке PBST и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Вторичное антитело (Sigma, ref: A4416) разводили 1/10 000 в молоке PBST и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Иммуноблоттинг визуализировали с использованием субстрата luminata crescendo HRP (Millipore, ссылка: WBLUR0100) и ImageQuant Las4000 (GE Healthcare). Для выборки MG1655 был преобразован с использованием всех различных усеченных версий SpoT, закодированных с помощью pUT18c.Клетки росли в течение 3 ч 00 мин (OD: 0,5) при 30 ° C в LB. Продукцию белка индуцировали добавлением 1 мМ IPTG в течение 4H00. Готовили образец, и равное количество общих белков наносили на дорожку на SDS-PAGE.

Моделирование белков и имитация молекулярного докинга

Доступные координаты атомов RelA (PDB ID: 5KPV) из E. coli использовались в качестве шаблона для создания модели E. coli SpoT (30,4% / 64,3% идентичность / сходство) с использованием SWISS-MODEL (веб-интегрированный сервис для моделирования гомологии структуры белков) ⁵⁶ .Аналогично, модель E. coli YtfK была создана с использованием ЯМР-структуры гомолога YtfK из Shewanella oneidensis (PDB ID: 2JRO; 30,3% / 65,8% идентичности / сходства с E. coli YtfK).

Для моделирования интерфейса привязки YtfK-SpoT ^1–378 мы использовали интерфейс веб-сервера HADDOCK2.2. Чтобы определить ограничения для прогона пикши, мы использовали открытые на поверхности остатки как YtfK, так и SpoT в качестве активных остатков, которые могут быть непосредственно вовлечены во взаимодействие.Для SpoT и YtfK мы отобрали остатки на поверхности вручную с помощью PyMol (дополнительная таблица 2). Было выполнено три независимых моделирования стыковки. Для каждого прогона были сгенерированы десять кластеров, которые были классифицированы на основе их оценки HADDOCK. Пять моделей YtfK / SpoT, выбранных из пяти лучших кластеров, показаны на дополнительном рисунке 10, а параметры соответствующих кластеров, сгенерированных пикшей, показаны в дополнительной таблице 3.

Флуоресцентная микроскопия и анализ

Ночное культивирование WT и ytfK -L-mNeonGreen в минимальной среде MOPS разводили в 1000 раз в той же среде и инкубировали при 37 ° C до тех пор, пока OD ₆₀₀ нм не достигала 0.25. Затем клетки голодали, используя тот же протокол, который использовался для измерения уровня (p) ppGpp in vivo. Микроскопические изображения получали с использованием инвертированного эпифлуоресцентного микроскопа Nikon Eclipse TiE PFS (100-кратный масляный объектив NA 1,45, фазовый контраст) и цифровой камеры Hamamatsu C11440 ORCA-Flash5.0 LT. Изображения были получены с помощью программного обеспечения NS elements. Образцы (3 мкл клеток) наносили на покровное стекло размером 24 × 50 мм и покрывали непосредственно тонкой подушечкой из минимальной среды с добавлением 1,5% агарозы. Для каждой точки было снято 20 полей с использованием системы идеальной фокусировки (PFS) и моторизованного столика.Флуоресцентные изображения были получены с помощью диаскопии (DIA) и фильтра GFP (возбуждение 482/35 нм, испускание 536/40 нм). Время экспозиции составляло 30 мс и 300 мс соответственно. Изображения были проанализированы в формате TIFF с помощью плагина MicrobeJ ⁵⁷ , доступного для загрузки в программе FIJI.

Порог определялся для каждого эксперимента по обнаружению бактерий. Затем фоны вычитались с радиусом катящегося шарика 30 пикселей, и флуоресценция каждого условия измерялась с помощью MicrobeJ.Все изображения имеют одинаковый контраст и были получены и проанализированы одинаково.

Сводка отчетов

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

Бесплатный генератор шаблонов для подписи электронной почты от HubSpot

FAQ Content

Как пользоваться этим инструментом?

1. Начиная с первой вкладки в редакторе, выберите шаблон, который вы хотите применить к своей электронной подписи.
2. Щелкните вторую вкладку, чтобы ввести данные вашей подписи электронной почты, такие как ваше имя, адрес электронной почты, номер телефона и т. Д.
3. Щелкните третью вкладку, чтобы стилизовать подпись. Это включает в себя выбор цвета вашего бренда, шрифта и размера шрифта.
4. На четвертой и последней вкладке загрузите любые изображения, которые вы хотите отображать в своей электронной подписи. Это включает в себя возможность загрузки изображения профиля и логотипа компании в дополнение к одному настраиваемому призыву к действию.
5. Закончив редактирование подписи, нажмите кнопку «Создать подпись», чтобы подтвердить данные подписи и разблокировать ее для использования.

Как получить подпись с помощью этого инструмента в моем почтовом клиенте?

После того, как вы разблокировали подпись электронной почты, используйте призыв к действию «Копировать», чтобы скопировать подпись или исходный код.

В зависимости от вашего почтового клиента, будут разные шаги для загрузки вашей электронной подписи. Чтобы помочь, мы рассмотрели инструкции по добавлению подписи электронной почты в HubSpot, Gmail, Outlook, Apple Mail и Yahoo Mail ниже.

Как мне добавить мою новую подпись электронной почты в HubSpot?

Чтобы добавить персонализированную подпись в HubSpot, вы должны: 1) иметь установленную HubSpot CRM в вашей учетной записи 2) иметь доступ к продажам.Чтобы настроить подпись электронной почты, которая будет использоваться для личных писем, отправляемых через CRM, следуйте инструкциям ниже:

1. Скопируйте исходный код из генератора шаблонов подписи электронной почты.
2. Войдите в свою учетную запись и щелкните имя своей учетной записи в правом верхнем углу. Затем выберите Профиль и настройки.
3. Прокрутите вниз до раздела «Подпись» и выберите справа параметр «Изменить подпись».
4. Выберите вариант HTML в правом верхнем углу и вставьте код, сгенерированный генератором шаблонов подписи электронной почты, в текстовое поле.
5. Щелкните Сохранить.

Нет HubSpot CRM? Это совершенно бесплатно. Щелкните здесь, чтобы начать сегодня.

Как добавить новую подпись электронной почты в Gmail?

1. Войдите в свою учетную запись Gmail, затем щелкните шестеренку в правом верхнем углу.
2. В раскрывающемся меню выберите «Настройки».
3. Прокрутите вниз, пока не дойдете до редактора подписи электронной почты, затем вставьте туда свою новую подпись электронной почты.
4. Прокрутите страницу вниз и нажмите «сохранить изменения».

Как добавить новую подпись электронной почты в Outlook?

1. Войдите в свою учетную запись Outlook и выберите вкладку «Главная»> «Новый адрес электронной почты»
2. Щелкните вкладку Сообщение
3. В разделе Включить группу выберите Подпись> Подписи
4. В разделе «Выбрать подпись по умолчанию» обязательно выберите учетную запись, которую вы хотите связать с подписью, из раскрывающегося списка учетной записи электронной почты
5. В разделе «Выберите подпись для редактирования» нажмите кнопку «Создать» и назовите свою подпись
.
6. В разделе «Изменить подпись» вставьте подпись, сгенерированную HubSpot, и нажмите «ОК».

Как добавить новую подпись электронной почты в Apple Mail?

1. Откройте приложение Почта и войдите в свою учетную запись.
2. Щелкните «Почта», а затем «Настройки» в верхнем левом углу экрана.
3. Во всплывающем окне настроек щелкните вкладку «Подписи».
4. Щелкните кнопку + внизу среднего столбца.
5. Вставьте свою новую подпись электронной почты в правый столбец и убедитесь, что сняли флажок , в котором говорится, «всегда соответствовать моему шрифту сообщения по умолчанию».
6. Закройте всплывающее окно для сохранения.

Как добавить новую подпись электронной почты в Yahoo Mail?

1. Войдите в свою учетную запись Yahoo Mail и выберите «Настройки»> «Дополнительные настройки».
2. В левой части экрана выберите «Написание электронного письма» и найдите заголовок «Подпись».
3. Если у вас несколько учетных записей Yahoo Mail, используйте переключатель, чтобы выбрать учетную запись, для которой вы хотите настроить подпись электронной почты.
4. Вставьте новую подпись электронной почты в текстовое поле, чтобы сохранить ее.

Я использую мобильный телефон — как создать подпись электронной почты?

Генератор шаблонов подписей электронной почты

в настоящее время предназначен только для настольных компьютеров. Это помогает нам гарантировать, что вы получаете наилучшие возможности редактирования подписи.Если вы пользуетесь мобильным телефоном, следуйте инструкциям, чтобы отправить инструмент себе по электронной почте для использования на компьютере позже.

Почему моя подпись в электронной почте выглядит не так, как ожидалось?

Если ваша подпись выглядит не так, как ожидалось, попробуйте следующие решения:

1. На мобильном устройстве: Почти каждый шаблон подписи электронной почты будет отображаться должным образом как на мобильном устройстве, так и на компьютере, за исключением шаблона 3. Если вы используете шаблон 3, удалите все изображения (снимок головы и логотип), чтобы гарантировать оптимизированный мобильный дисплей.
2. Попробуйте использовать другой веб-браузер , чтобы создать свою подпись. Некоторые веб-браузеры не копируют форматирование вместе с текстом, и это меняется с каждым обновлением браузеров.
3. Некоторые почтовые клиенты требуют, чтобы вы копировали исходный код, а не саму подпись электронной почты для загрузки. Если ваша подпись отображается неправильно, попробуйте вместо этого скопировать и загрузить исходный код.

Amazon.com: Электронная подкладка для мяча для гольфа Technasonic Check-Go Pro Sweet Spot: Спортивные товары: Спорт и туризм

После большого количества чтений о балансе мяча (о котором я никогда не думал) от маркировки соленой водой до Check-Go, я решил приобрести продукт.Было увлекательно испытать множество шаров, чтобы увидеть, как этот продукт отреагирует! Я обнаружил, что независимо от производителя мячей для гольфа, большинство из них не были идеально сбалансированы (использование соленой воды или Check-Go доказали это).

Теперь я не люблю покупать дорогие мячи, потому что я просто не могу оправдать трату долларов на мяч по сравнению с пенни на мяч с хорошим ощущением комфорта. Меньше плача, когда я проигрываю более дешевый мяч по сравнению с мячом за 6 долларов. Я играл дорогими мячами и шарами Wilson Smart core, которые мне нравятся, и я обнаружил очень небольшую разницу в игре и комфорте (я стреляю от средних до высоких 80-х).Так что было интересно проверить баланс между разными мячами для гольфа.

Использование теста в соленой воде показало, что около 90% мячей вышли из равновесия и что то же самое место попадет на вершину, если этого не произойдет, это покажет, что мяч сбалансирован. Передача этой информации в Check-Go показала то же самое, но с «экватором» мяча. Место, которое я отметил с первой попытки с Check-Go, вернулось на вершину. Небольшой процент шаров отмеченной точки ушел на дно, но экватор остался прежним.Меньший процент мячей никогда не выстраивался в одну и ту же линию, что указывает на то, что мяч был идеально сбалансированным. Что соответствовало тесту в соленой воде.

Что мне показалось интересным, так это то, что выравнивание между двумя разными методами очень редко показывало одно и то же местоположение и отличалось на несколько градусов. Не уверен, что сейчас лучше, но я с нетерпением жду весны, чтобы протестировать его на трассе. Моя жена считает меня сумасшедшим, но она не играет в гольф. LOL

Наука, лежащая в основе «баланса», имеет для меня смысл, если вы думаете о снижении веса некоторых и о процессе высокоскоростного производства.Сколько паттов пропускает очень небольшое количество ударов? Я не говорю, что это сделает меня скретч-игроком (ох, но это было бы неплохо), но если это поможет мне сделать еще 4 раза в раунде с 18 лунками, оно того стоит.

Сезон гольфа !!!

Левин, Джек Э., Левин, Норма Р., Левин, Джек Э., Левин, Норма Р., Левин, Марк Р .: 9781481469074: Amazon.com: Книги

PreS-Gr 1 — Историк-бестселлер и художник Джек Левин отдыхает от приключений американских президентов, чтобы сосредоточиться на теме, гораздо более близкой к дому, — на семейной собаке.Спот основан на его настоящей собаке, Спорти. Левины обладают талантом создавать простые, но живые рисунки с причудливыми выражениями. Пятно тщательно проработано, а пастельные иллюстрации хорошо сочетаются с текстом, что позволяет детям легко расшифровать действия и предметы на протяжении всего повествования. Хотя истинное происхождение Спота вносит вклад в создание книги, предисловие и введение кажутся неуместными в начале этой книги с картинками. ВЕРДИКТ Эта простая история понравится как начинающим читателям, так и любителям собак.Веселое и приятное дополнение, но не обязательная покупка. — Мария Алегре, Школа Далтона, Нью-Йоркα (c) Авторские права 2011. Library Journals LLC, дочерняя компания Media Source, Inc. Распространение запрещено.

Джек Э. Левин (1925–2018) был № 1 New York Times автора бестселлеров Злоба навстречу Нет ; Джордж Вашингтон: перекресток ; Геттисбергский адрес Авраама Линкольна Иллюстрированный ; Притчи для молодежи; и Наша полиция .Он был писателем, художником и мелким бизнесменом и был женат на своей жене Норме шестьдесят лет.

Норма Р. Левин была педагогом и небольшой бизнес-леди. Норма и Джек женаты шестьдесят пять лет и являются родителями трех сыновей, семи внуков и одной правнучки.

Марк Р. Левин, ведущий общенационального радиовещания, ведущий LevinTV , председатель Landmark Legal Foundation и ведущий передачи Fox News Life, Liberty и Levin , является автором семи последовательных # 1 New York Times бестселлеров: Свобода и тирания , Америтопия , Поправки о свободе , Грабеж и обман , Новое открытие американизма , Несвобода прессы и Американский марксизм и Американский марксизм.Liberty and Tyranny три месяца занимала первое место и было продано более 1,5 миллиона копий. Его книги Люди в черном и Спасающий спрайт также были бестселлерами New York Times . Левин является членом Зала славы национального радио и был главным советником нескольких членов кабинета президента Рональда Рейгана.